FAQ | LONG R3 IGF-I

はい、LONG^®R3 IGF-I 100mLおよび50mgサイズ*はcGMP基準に従って製造されています。製造施設は、欧州および米国の委託製造業者とバイオ製薬会社により定期的に監査されています。

_{*すべての製品はGMPガイドラインに基づいて製造されていますが、製造で使用する完全なGMP検証を取得しているのは、大きなパックサイズのみです。}

いいえ、LONG^®R3 IGF-IはE. coli.プロセスで製造された、cGMPグレードの組換えタンパク質です。動物由来の成分を含まないプロセスを使用して、哺乳類細胞培養用に特化して製造されています。LONG^®R3 IGF-Iは規制に準拠しており、現在はFDA（米国）、EMEA（ヨーロッパ）、MHLW（日本）により承認されたバイオ医薬品の製造に使用されています。

LONG^®R³ IGF-Iは、独自の、従来型の発現系で製造されています。検証済みの作業用細胞バンクから採取した細胞は、完全に定義された動物質を含まない培地を使用して、フェッドバッチプロセスで発酵させます。次に、組換えLONG^®R³ IGF-Iを封入体から単離し、酸化還元緩衝液でリフォールディングし、4段階のクロマトグラフィープロセスで精製します。

LONG^®R³ IGF-I は、凍結乾燥粉末、および100 mM酢酸中の1 mg/mL液体製剤として入手できます。

LONG^®R3 IGF-Iは、5または50 mgサイズのバイアルに入った凍結乾燥粉末としてRepligenから入手できます。LONG^®R3 IGF-I の1 mg/mL液体製剤は、5 mL、100 mL、250 mL、500 mL、および1,000mLで利用できます。

外観、製品の同一性（RP-HPLC、質量分析）、純度、生物活性、およびバイオバーデン分析。

使用前に、凍結乾燥されたLONG^®R³ IGF-Iを元に戻す必要があります。

1. 生成物は、わずかな減圧（-25 kPa）の窒素雰囲気で供給されます。
2. ガラスのバイアルから金属キャップを取り外し、セプタムを通して空気を満たしたシリンジを導入して圧力を均一にします。
3. LONG^®R³ IGF-Iの濃度を1 mg/mLに調整するのに必要な量の100 mM酢酸溶液をバイアルに追加します。ストック溶液を ≥1 mg/mLにしておくことをお勧めします。
4. 溶液をよく混ぜて、ペプチドを完全に溶解させます。
5. 再懸濁したLONG^®R³ IGF-Iや、LONG^®R³ IGF-Iを含む培地は、0.22 μmの細孔サイズを持つタンパク結合率の低いメンブレン（ポリフッ化ビニリデン（PVDF）やポリエーテルスルホン（PES）など）を用いてろ過できます。

 Liquid LONG^®R³ IGF-Iは、使用する準備ができており、解凍または再構成する必要はありません。開封して細胞培養培地に直接希釈するだけです。

実験では、少量のLONG^®R³ IGF-Iがろ過中に失われることが示されています。以下の表は、各フィルターメンブレンでのLONG^®R³ IGF-Iの損失量を示しています。

いいえ、溶液のpHが最適ではないため、LONG^®R³ IGF-Iの沈殿が生じる可能性があります。

細胞培養培地中に粉末を溶解することはお勧めしません。

インスリンや低分子ペプチドと同様に、LONG^®R³ IGF-Iはタンパク質含有量の少ない培地において、プラスチック、ガラス、ステンレス鋼の表面に非特異的に吸着される場合があります。ほとんどの場合、このような吸着は最小限のものであり、細胞培養全体の性能には影響しません。しかし、不適切で一貫していないサンプルの取り扱い手順を行った場合、LONG^®R³ IGF-Iの検出の精度に影響する可能性があります。

LONG^®R³IGF-Iの非特異的な吸着を最小限に抑えるために

• LONG^®R³ IGF-Iの保存液濃度は1 mg/mL以上にしてください。
• タンパク質結合性の低いフィルター（PVDF、PESなど）を常に使用してください。
• 必要に応じて、LONG^®R³ IGF-Iを培地製造プロセスのできるだけ下側に、できれば直接発酵タンクに投入してください。

凍結乾燥されたLONG^®R³ IGF-Iは、2〜8℃で適切に保管する場合、5年間安定です。液体タイプのLONG^®R³ IGF-Iは、未開封の元のバイアルで2〜8℃で保存する場合、5年間安定です。

元に戻した凍結乾燥LONG^®R³ IGF-I、および液体タイプのLONG^®R³ IGF-Iの開いた容器は、元のバイアルに再度蓋をした上で、2〜8℃で保管してください。

元に戻した場合は、少量の溶液（シングルユース用）をLoBindエッペンドルフチューブに分注して、2～8℃に保持することで保管できます。タンパク質の吸収を抑えるために、LoBindチューブの使用を推奨します。このようにして保管された溶液は12か月間使用できます。

LONG^®R³ IGF-Iの測定における一貫性と精度を確保するため、次のことを推奨します。

• 細胞培養培地サンプルのサンプリングと取り扱いの手順を標準化してください。
• サンプルの取り扱いや保管に最適な、タンパク結合率の低いチューブを使用してください。
• サブサンプリングを避け、表面への繰り返しの露出を最小限に抑えてください。
• 培地やチューブにキャリアタンパク質が存在すると、非特異的吸着が抑制されます。
• 分析前に、すべてのサンプルの温度が室温に保たれていることを確認してください。

はい、Repligenの酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）キットを用いて、LONG^®R³ IGF-Iのサンプル中濃度を測定できます。

詳細

LONG^®R³ IGF-Iが、CHO細胞培養における細胞成長、および全体的な容積生産性を増加させることが実証されています。また、LONG^®R³ IGF-Iではアポトーシスを減少させ、培養時間を延長することによってタンパク質生産を増強することができます。

I型IGF受容体を持っている細胞、またはインスリン感受性のある細胞であれば、LONG^®R³ IGF-Iに対する反応性を示す可能性があります。これには、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）、線維芽細胞、ハイブリドーマ、胚性幹細胞（ES）、ナチュラルキラー細胞（NK）、間葉系幹細胞（MSC）、造血幹細胞（HSC）など、商業的に使用されているほとんどの細胞株が含まれますが、これらに限定されません。

pHや浸透圧への影響はありません。これは、無菌状態のLONG^®R³ IGF-Iが大幅に希釈された状態で細胞培養培地に投入されるためです。

LONG^®R³ IGF-Iが機能する濃度範囲は10～100 μg/Lです。50 μg/ Lから開始して滴定を行い、細胞株、プロセス、用途に合わせて濃度を最適化することを推奨します。

LONG^®R³ IGF-Iを含む培地に細胞を適応させる方法として、直接適応させる方法と段階的に適応させる方法があります。適応プロセスを開始するためには、細胞が対数増殖期の中間にあり、かつ生存率が90％以上である必要があります。

1. 直接
   一部のクローンでは段階的な適応が必要ありません。適切な量のLONG^®R³ IGF-I（通常10〜100 μg/L）を含む培地ですぐに成長を開始できます。
    
2. シーケンシャル
   堅牢性の低いクローンの場合、新しい培地に段階的に適応させる必要があることがあります。LONG®R³ IGF-Iを含む培地と含まない培地を25%:75%の割合で混合した培地で、細胞を継代培養することから開始してください。細胞生存率が90％を超え、かつ細胞倍加時間が安定している場合、細胞を次の混合培地（50%:50%）に移します。成長が遅くなるか生存率が低下した場合、生存率と倍加時間が安定するまで、細胞を同じ培地で継代し続ける必要があります。

LONG^®R³ IGF-Iとインスリンを組み合わせた場合に、一部の細胞株に対して効果が表れることがあります。異なる細胞株、用途、プロセスでの使用ごとにLONG^®R³ IGF-Iの量を最適化することを推奨します。

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