はい、LONG®R3 IGF-I 100mLおよび50mgサイズ*はcGMP基準に従って製造されています。製造施設は、欧州および米国の委託製造業者とバイオ製薬会社により定期的に監査されています。
*すべての製品はGMPガイドラインに基づいて製造されていますが、製造で使用する完全なGMP検証を取得しているのは、大きなパックサイズのみです。
いいえ、LONG®R3 IGF-IはE. coli.プロセスで製造された、cGMPグレードの組換えタンパク質です。動物由来の成分を含まないプロセスを使用して、哺乳類細胞培養用に特化して製造されています。LONG®R3 IGF-Iは規制に準拠しており、現在はFDA(米国)、EMEA(ヨーロッパ)、MHLW(日本)により承認されたバイオ医薬品の製造に使用されています。
LONG®R3 IGF-Iは、独自の、従来型の発現系で製造されています。検証済みの作業用細胞バンクから採取した細胞は、完全に定義された動物質を含まない培地を使用して、フェッドバッチプロセスで発酵させます。次に、組換えLONG®R3 IGF-Iを封入体から単離し、酸化還元緩衝液でリフォールディングし、4段階のクロマトグラフィープロセスで精製します。
LONG®R3 IGF-I は、凍結乾燥粉末、および100 mM酢酸中の1 mg/mL液体製剤として入手できます。
LONG®R3 IGF-Iは、5または50 mgサイズのバイアルに入った凍結乾燥粉末としてRepligenから入手できます。LONG®R3 IGF-I の1 mg/mL液体製剤は、5 mL、100 mL、250 mL、500 mL、および1,000mLで利用できます。
外観、製品の同一性(RP-HPLC、質量分析)、純度、生物活性、およびバイオバーデン分析。
使用前に、凍結乾燥されたLONG®R3 IGF-Iを元に戻す必要があります。
Liquid LONG®R3 IGF-Iは、使用する準備ができており、解凍または再構成する必要はありません。開封して細胞培養培地に直接希釈するだけです。
実験では、少量のLONG®R3 IGF-Iがろ過中に失われることが示されています。以下の表は、各フィルターメンブレンでのLONG®R3 IGF-Iの損失量を示しています。
フィルターの種類 |
LONG®R3 IGF-Iの損失率(%) |
0.2 μm ポリエーテルスルホン(PES) |
2% |
0.1 μm ポリエーテルスルホン(PES) |
5% |
0.2 μmポリビニリデン(PVDF) |
1%未満 |
0.1 μmポリビニリデン(PVDF) |
6% |
0.2 μm セルロースアセテート(CA) |
11% |
いいえ、溶液のpHが最適ではないため、LONG®R3 IGF-Iの沈殿が生じる可能性があります。
細胞培養培地中に粉末を溶解することはお勧めしません。
インスリンや低分子ペプチドと同様に、LONG®R3 IGF-Iはタンパク質含有量の少ない培地において、プラスチック、ガラス、ステンレス鋼の表面に非特異的に吸着される場合があります。ほとんどの場合、このような吸着は最小限のものであり、細胞培養全体の性能には影響しません。しかし、不適切で一貫していないサンプルの取り扱い手順を行った場合、LONG®R3 IGF-Iの検出の精度に影響する可能性があります。
LONG®R3IGF-Iの非特異的な吸着を最小限に抑えるために
凍結乾燥されたLONG®R3 IGF-Iは、2〜8℃で適切に保管する場合、5年間安定です。液体タイプのLONG®R3 IGF-Iは、未開封の元のバイアルで2〜8℃で保存する場合、5年間安定です。
元に戻した凍結乾燥LONG®R3 IGF-I、および液体タイプのLONG®R3 IGF-Iの開いた容器は、元のバイアルに再度蓋をした上で、2〜8℃で保管してください。
元に戻した場合は、少量の溶液(シングルユース用)をLoBindエッペンドルフチューブに分注して、2~8℃に保持することで保管できます。タンパク質の吸収を抑えるために、LoBindチューブの使用を推奨します。このようにして保管された溶液は12か月間使用できます。
LONG®R3 IGF-Iの測定における一貫性と精度を確保するため、次のことを推奨します。
はい、Repligenの酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)キットを用いて、LONG®R3 IGF-Iのサンプル中濃度を測定できます。
LONG®R3 IGF-Iが、CHO細胞培養における細胞成長、および全体的な容積生産性を増加させることが実証されています。また、LONG®R3 IGF-Iではアポトーシスを減少させ、培養時間を延長することによってタンパク質生産を増強することができます。
I型IGF受容体を持っている細胞、またはインスリン感受性のある細胞であれば、LONG®R3 IGF-Iに対する反応性を示す可能性があります。これには、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)、線維芽細胞、ハイブリドーマ、胚性幹細胞(ES)、ナチュラルキラー細胞(NK)、間葉系幹細胞(MSC)、造血幹細胞(HSC)など、商業的に使用されているほとんどの細胞株が含まれますが、これらに限定されません。
pHや浸透圧への影響はありません。これは、無菌状態のLONG®R3 IGF-Iが大幅に希釈された状態で細胞培養培地に投入されるためです。
LONG®R3 IGF-Iが機能する濃度範囲は10~100 μg/Lです。50 μg/ Lから開始して滴定を行い、細胞株、プロセス、用途に合わせて濃度を最適化することを推奨します。
LONG®R3 IGF-Iを含む培地に細胞を適応させる方法として、直接適応させる方法と段階的に適応させる方法があります。適応プロセスを開始するためには、細胞が対数増殖期の中間にあり、かつ生存率が90%以上である必要があります。
ステップ |
開始時の培地の割合(%) |
LONG®R3IGF-Iでの培地の割合(%) |
次のステップに進むための基準 |
1 |
75 |
25 |
生存率が90%以上、細胞倍加時間が安定 |
2 |
50 |
50 |
|
3 |
25 |
75 |
|
4 |
0 |
100 |
LONG®R3 IGF-Iとインスリンを組み合わせた場合に、一部の細胞株に対して効果が表れることがあります。異なる細胞株、用途、プロセスでの使用ごとにLONG®R3 IGF-Iの量を最適化することを推奨します。
ヒト用の用途におけるLONG®R3 IGF-Iの使用は許可されていません。RepligenはLONG®R3 IGF-Iを有資格のお客様にのみ提供しています。また、細胞培養サプリメントとしての使用、あるいはその他の研究目的での使用が明示されています。