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FAQ | LONG R3 IGF-I

Frequently Asked Questions | LONG®R3 IGF-I

すべて展開

Yes, LONG®R3 IGF-I 100mL and 50mg sizes* are manufactured according to cGMP standards. The production facility is regularly audited by European and US contract manufacturers and biopharmaceutical companies.

*すべての製品はGMPガイドラインに基づいて製造されていますが、製造で使用する完全なGMP検証を取得しているのは、大きなパックサイズのみです。

いいえ、LONG®R3 IGF-IはE. coli.プロセスで製造された、cGMPグレードの組換えタンパク質です。動物由来の成分を含まないプロセスを使用して、哺乳類細胞培養用に特化して製造されています。LONG®R3 IGF-Iは規制に準拠しており、現在はFDA(米国)、EMEA(ヨーロッパ)、MHLW(日本)により承認されたバイオ医薬品の製造に使用されています。

LONG®R3 IGF-I is manufactured in a proprietary, but conventional, expression system. Cells taken from a validated working cell bank are fermented in a fed-batch process using fully defined animal component free media. Recombinant LONG®R3 IGF-I is then isolated from inclusion bodies, refolded in redox buffer, and purified by a four-stage chromatography process.

LONG®R3 IGF-I is available as a lyophilized powder, and a 1mg/mL liquid formulation in 100 mM acetic acid.

LONG®R3 IGF-I is available from Repligen as a freeze-dried powder in 5 or 50 mg size vials. The 1 mg/mL liquid formulation of LONG®R3 IGF-I is available in 5 mL, 100 mL, 250mL, 500mL and 1,000mL sizes.

Appearance, product identity (RP-HPLC, mass spectroscopy), purity, biological activity and bio-burden analysis.

使用前に、凍結乾燥されたLONG®R3 IGF-Iを元に戻す必要があります。

  1. The product is supplied in an atmosphere of nitrogen at a slight vacuum (-25 kPa).
  2. Remove the metal cap from the glass vial and introduce an air- filled syringe through the septum to equalize the pressure.
  3. Add sufficient 100 mM acetic acid solution to the vial to achieve a concentration of 1 mg/mL LONG®R3 IGF-I. We recommend keeping stock solution at ≥1 mg/mL.
  4. 溶液をよく混ぜて、ペプチドを完全に溶解させます。
  5. 再懸濁したLONG®R3 IGF-Iや、LONG®R3 IGF-Iを含む培地は、0.22 μmの細孔サイズを持つタンパク結合率の低いメンブレン(ポリフッ化ビニリデン(PVDF)やポリエーテルスルホン(PES)など)を用いてろ過できます。

 Liquid LONG®R3 IGF-I is ready to use, there is no need to defrost or reconstitute. Simply open and dilute directly into cell culture media.

実験では、少量のLONG®R3 IGF-Iがろ過中に失われることが示されています。以下の表は、各フィルターメンブレンでのLONG®R3 IGF-Iの損失量を示しています。

フィルターの種類

LONG®R3 IGF-Iの損失率(%)

0.2 μm ポリエーテルスルホン(PES)

2%

0.1 μm ポリエーテルスルホン(PES)

5%

0.2 μm Polyvinylidene (PVDF)

1%未満

0.1 μm Polyvinylidene (PVDF)

6%

0.2 μm セルロースアセテート(CA)

11%

No, the pH of the solution will not be optimal and may result in precipitation of the LONG®R3 IGF-I.

We do not recommend that the powder be dissolved in cell culture media.

インスリンや低分子ペプチドと同様に、LONG®R3 IGF-Iはタンパク質含有量の少ない培地において、プラスチック、ガラス、ステンレス鋼の表面に非特異的に吸着される場合があります。ほとんどの場合、このような吸着は最小限のものであり、細胞培養全体の性能には影響しません。しかし、不適切で一貫していないサンプルの取り扱い手順を行った場合、LONG®R3 IGF-Iの検出の精度に影響する可能性があります。

To minimize non-specific adsorption of LONG®R3 IGF-I

  • LONG®R3 IGF-Iの保存液濃度は1 mg/mL以上にしてください。
  • タンパク質結合性の低いフィルター(PVDF、PESなど)を常に使用してください。
  • 必要に応じて、LONG®R3 IGF-Iを培地製造プロセスのできるだけ下側に、できれば直接発酵タンクに投入してください。

凍結乾燥されたLONG®R3 IGF-Iは、2〜8℃で適切に保管する場合、5年間安定です。液体タイプのLONG®R3 IGF-Iは、未開封の元のバイアルで2〜8℃で保存する場合、5年間安定です。

元に戻した凍結乾燥LONG®R3 IGF-I、および液体タイプのLONG®R3 IGF-Iの開いた容器は、元のバイアルに再度蓋をした上で、2〜8℃で保管してください。

元に戻した場合は、少量の溶液(シングルユース用)をLoBindエッペンドルフチューブに分注して、2~8℃に保持することで保管できます。タンパク質の吸収を抑えるために、LoBindチューブの使用を推奨します。このようにして保管された溶液は12か月間使用できます。

To ensure consistency and accuracy in the measurement of LONG®R3 IGF-I, we recommend the following:

  • 細胞培養培地サンプルのサンプリングと取り扱いの手順を標準化してください。
  • サンプルの取り扱いや保管に最適な、タンパク結合率の低いチューブを使用してください。
  • サブサンプリングを避け、表面への繰り返しの露出を最小限に抑えてください。
  • 培地やチューブにキャリアタンパク質が存在すると、非特異的吸着が抑制されます。
  • 分析前に、すべてのサンプルの温度が室温に保たれていることを確認してください。

はい、Repligenの酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)キットを用いて、LONG®R3 IGF-Iのサンプル中濃度を測定できます。

詳細

LONG®R3 IGF-Iが、CHO細胞培養における細胞成長、および全体的な容積生産性を増加させることが実証されています。また、LONG®R3 IGF-Iではアポトーシスを減少させ、培養時間を延長することによってタンパク質生産を増強することができます。

I型IGF受容体を持っている細胞、またはインスリン感受性のある細胞であれば、LONG®R3 IGF-Iに対する反応性を示す可能性があります。これには、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)、線維芽細胞、ハイブリドーマ、胚性幹細胞(ES)、ナチュラルキラー細胞(NK)、間葉系幹細胞(MSC)、造血幹細胞(HSC)など、商業的に使用されているほとんどの細胞株が含まれますが、これらに限定されません。

pHや浸透圧への影響はありません。これは、無菌状態のLONG®R3 IGF-Iが大幅に希釈された状態で細胞培養培地に投入されるためです。

LONG®R3 IGF-Iが機能する濃度範囲は10~100 μg/Lです。50 μg/ Lから開始して滴定を行い、細胞株、プロセス、用途に合わせて濃度を最適化することを推奨します。

LONG®R3 IGF-Iを含む培地に細胞を適応させる方法として、直接適応させる方法と段階的に適応させる方法があります。適応プロセスを開始するためには、細胞が対数増殖期の中間にあり、かつ生存率が90%以上である必要があります。

  1. 直接
    一部のクローンでは段階的な適応が必要ありません。適切な量のLONG®R3 IGF-I(通常10〜100 μg/L)を含む培地ですぐに成長を開始できます。
     
  2. Sequential
    堅牢性の低いクローンの場合、新しい培地に段階的に適応させる必要があることがあります。LONG®R3 IGF-Iを含む培地と含まない培地を25%:75%の割合で混合した培地で、細胞を継代培養することから開始してください。細胞生存率が90%を超え、かつ細胞倍加時間が安定している場合、細胞を次の混合培地(50%:50%)に移します。成長が遅くなるか生存率が低下した場合、生存率と倍加時間が安定するまで、細胞を同じ培地で継代し続ける必要があります。

ステップ

開始時の培地の割合(%)

% Media with LONG®R3IGF-I

次のステップに進むための基準

1

75

25

生存率が90%以上、細胞倍加時間が安定

2

50

50

3

25

75

4

0

100

LONG®R3 IGF-Iとインスリンを組み合わせた場合に、一部の細胞株に対して効果が表れることがあります。異なる細胞株、用途、プロセスでの使用ごとにLONG®R3 IGF-Iの量を最適化することを推奨します。

ウェビナーを見る

ヒト用の用途におけるLONG®R3 IGF-Iの使用は許可されていません。RepligenはLONG®R3 IGF-Iを有資格のお客様にのみ提供しています。また、細胞培養サプリメントとしての使用、あるいはその他の研究目的での使用が明示されています。