MabSelect SuRe™ ELISA Kit Performance Summary
INTRODUCTION
Protein A ELISAキット（カタログ番号9333-1) は、残留MabSelect SuRe™ リガンドの検出と定量化を目的としています。当社のProtein A検出ELISAキットは、抗体産生中の少量の汚染物質MabSelect Sure™リガンドを測定するために高感度アッセイを必要とするお客様向けに開発されました。汚染の試験は、次のような開発および商業製造のいくつかの異なる段階で行われます。
- 特定の条件下での樹脂の浸出特性のプロセス開発
- 製造。通常は、精製プロセスのいくつかのポイントを通して採取された溶出サンプルから採取されます
- 製品リリースを終え、プロセスの封じ込めレベルとロット間の一貫性を文書化
以下の概要レポートには、ヒト免疫グロブリンG（hIgG）の存在下でのProtein A ELISAキットの評価から収集された性能データが含まれています。ここに示すデータは、Protein A ELISAキットの以下の内容を示すものです。
- PBS-Tバッファー中の最大0.5mg/ml hIgGの存在下でMabSelect SuRe™リガンドを検出する能力
- 回収率（精度）、インターアッセイおよびイントラアッセイの精度、定量限界、検出限界
RESULTS SUMMARY
hIgG存在下のMabSelect SuRe™
hIgGを含まない標準と比較して、hIgGの存在下でMabSelect SuRe™リガンドを検出する際に、Protein A ELISAキットの性能を評価しました。すべての添加サンプルの最終hIgG濃度は0.125 mg/mlでした（アッセイプレートへの最終希釈後）。各サンプルは8個ずつ複製して調製し、キットの標準プロトコルに従って3回のELISAを実施しました。
データ処理
標準曲線データポイントは4つのパラメータフィット分析をあてはめました。この式により、サンプルrPA濃度の逆計算とLoQ値の計算が可能になりました。回収率は、次のように計算されました。
イントラアッセイ精度
表1.標準曲線サンプルのイントラアッセイ精度
| 濃度（ng/ml） | 平均% CV |
|---|---|
| 1.6 | 5.1 |
| 0.8 | 2.3 |
| 0.4 | 3.3 |
| 0.2 | 4.0 |
| 0.1 | 5.2 |
| 0.05 | 7.5 |
表2.hlgGを含むサンプルのイントラアッセイ精度
| 濃度（ng/ml） | 計算濃度 | 平均% CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 6.1 |
| 1.0 | 1.01 | 5.3 |
| 0.8 | 0.76 | 4.1 |
| 0.6 | 0.64 | 4.9 |
| 0.4 | 0.37 | 5.4 |
| 0.2 | 0.18 | 7.7 |
| 0.1 | 0.09 | 11.0 |
| 0.05 | 0.05 | 18.0 |
インターアッセイ精度
表3.標準曲線サンプルのインターアッセイ精度
| 濃度（ng/ml） | 平均% CV |
|---|---|
| 1.6 | 0.1 |
| 0.8 | 0.2 |
| 0.4 | 0.8 |
| 0.2 | 1.6 |
| 0.1 | 2.1 |
| 0.05 | 2.7 |
表4.hlgGを含むサンプルのインターアッセイ精度
| 濃度（ng/ml） | 計算濃度 | 平均% CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 7.6 |
| 1.0 | 1.01 | 0.9 |
| 0.8 | 0.76 | 2.6 |
| 0.6 | 0.64 | 8.6 |
| 0.4 | 0.37 | 6.3 |
| 0.2 | 0.18 | 13.0 |
| 0.1 | 0.09 | 10.4 |
| 0.05 | 0.05 | 9.0 |
精度
表5.標準曲線サンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 平均エラー（%） | 平均回収率% |
|---|---|---|
| 1.6 | 0.0 | 100 |
| 0.8 | 0.4 | 100 |
| 0.4 | -0.7 | 99 |
| 0.2 | -1.3 | 99 |
| 0.1 | 2.1 | 102 |
| 0.05 | 7.3 | 107 |
表6.hlgGを含むサンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 計算 濃度 |
平均エラー（%） | 平均修復% |
|---|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 3.8 | 104 |
| 1.0 | 1.01 | 1.2 | 101 |
| 0.8 | 0.76 | -4.5 | 96 |
| 0.6 | 0.64 | 5.9 | 106 |
| 0.4 | 0.37 | -8.2 | 92 |
| 0.2 | 0.18 | -8.0 | 92 |
| 0.1 | 0.09 | -8.8 | 91 |
| 0.05 | 0.05 | -7.8 | 92 |
定量限界（LoQ）
標準曲線から決定されたLoQは0.025ng/mlと計算されました。hIgGの存在下でのMabSelect SuRe™ リガンド添加サンプルのLoQは、0.115 ng/mlまたは0.920 ng/mg（0.92ppm）でした。このデータセットに基づくと、免疫グロブリンの存在下でMabSelect SuRe™ リガンドを検出する際のキットの感度は < 1 part per million（ppm）でした。
希釈の直線性
図 1. 希釈グラフの直線性は、試験されたMabSelect SuRe™リガンド濃度の範囲全体にわたる精度の高い相関関係を示すグラフです。
CONCLUSIONS
イントラアッセイデータは、3つのアッセイの精度が許容可能なパラメータの範囲内であり、標準の%CV値は2.3-7.5%の範囲であることを示しました。この実験のセットのLoQは、標準的な0.025 ng/mlでした。
イントラアッセイデータは、hIgGを含むサンプルが相対的な精度と精度でアッセイされ、%CV値が11.0-4.1%であることを示しました。算出されたサンプルのLoQは0.115 ng/mlでした。%相対誤差で測定した精度は、標準の場合は7.3から-1.3、サンプルの場合は-8.8から5.9でした。
インターアッセイデータにも同様の知見がありました。標準曲線サンプル間の%CVは、すべての濃度で2.7未満であり、3つのアッセイ全体の精度を示しています。hIgGを含むサンプルは、精度が高く、%CV値はLoQを超える濃度の場合に13.0-0.9%の範囲を示しました。
計算の説明
精度（%CV）
精度は、rPA添加サンプルデータポイント間の標準偏差を決定し、平均値で割ることによって計算されました。「業界ガイダンス: 生体分析方法検証」テキストによると、精度は15%以内でなければなりません。
イントラアッセイ精度
イントラアッセイ精度は、すべてのアッセイで%CV値を平均することにより、rPA添加サンプル濃度ごとに計算されました。
インターアッセイ精度
3つのアッセイの各計算結果間の標準偏差を決定し、次に平均値で割ることにより、各濃度点についてインターアッセイの精度を計算しました。
定量限界（LoQ）
定量限界（LoQ）は、0 ng/mlサンプルの標準偏差の10倍と定義されました。0 ng/ml OD値の標準偏差に10を掛けてから、ベースの0 ng/mlのOD値に加算しました。次に、LoQは、合計値を標準曲線4-パラメータ適合式に入力することによって生成されました。各キットについて、LoQは、バッファー1 mlあたりのProtein A ng（ng/ml）、およびhIgGの存在下で実行されたrPA添加サンプルのhIgG 1 mgあたりのProtein A（ppm）として報告されました。
検出限界（LoD）
検出限界（LoD）は、0 ng/ml Protein Aサンプルの標準偏差の3倍として定義されました。0 ng/ml OD値の標準偏差に3を掛けてから、ベースの0 ng/mlのOD値に加算しました。次に、LoDは、合計値を標準曲線4-パラメータ適合式に入力することによって生成されました。各キットについて、LoDはProtein A ng/mlバッファー（ng/ml）およびparts per million（ppm）として報告されました。
精度
精度は、理論上のスパイク濃度と比較した、アッセイによって決定された回収率として説明されます。
MabSelect™、MabSelect SuRe™およびSuRe™はGE Healthcares社の登録商標です。