NGL-Impact® A ELISA Kit Performance Summary
INTRODUCTION
The Repligen NGL-Impact® A ELISA kit (Catalog number 9222-1) is intended for the detection and quantitation of residual NGL-Impact® Protein A. It was been developed for users who require a highly sensitive assay to measure small amounts of contaminating NGL-Impact® A in antibody products. Testing for NGL-Impact® A contamination occurs in several different phases of development and commercial manufacturing which may include:
- 特定の条件下での樹脂の浸出特性のプロセス開発
- 製造。通常は、精製プロセスのいくつかのポイントを通して採取された溶出サンプルから採取されます
- 製品リリースを終え、プロセスの封じ込めレベルとロット間の一貫性を文書化
The following summary report contains performance data collected from the evaluation of the NGL-Impact® A ELISA Kit in the presence of human Immunoglobulin G (hIgG). The data presented here demonstrates the following:
- Ability to detect NGL-Impact® A in the presence of up to 0.5 mg/ml hIgG in a PBS-T buffer using Dilute & Go method, or sample up to 10 mg/ml hIgG by Boil & Boost method
- 回収率（精度）、インターアッセイおよびイントラアッセイの精度、定量限界、検出限界
RESULTS SUMMARY
NGL-Impact® A in the presence of hIgG
The performance of the Repligen NGL-Impact® A ELISA kit was evaluated when detecting NGL-Impact® A in the presence of hIgG compared to a standard containing no hIgG. NGL-Impact® A spiked samples had a starting hIgG concentration of 0.5 mg/ml when diluted into the assay plate or had a 10 mg/ml hIgG initial concentration when using boiling method. Each spike sample was prepared in replicates of 3 and ELISA was performed according to the Kit’s standard protocol.
データ処理
Standard curve data points were fitted to linear regression line. This equation allowed back-calculation of sample NGL-Impact® A concentrations and calculation of LoQ values. Percent recovery was calculated as follows:
% Recovery = Calculated Conc X100
Theoretical Conc
イントラアッセイ精度
表1.標準曲線サンプルのイントラアッセイ精度 （hlgGなし）
| 濃度（ng/ml） | 平均% CV |
|---|---|
| 1.6 | 0.8 |
| 0.8 | 5.3 |
| 0.4 | 2.0 |
| 0.2 | 1.3 |
| 0.1 | 5.7 |
| 0.05 | 7.1 |
表2。Dilute & GoによるhlgG含有サンプルのアッセイ内精度
| 濃度（ng/ml） | 計算濃度 | 平均% CV |
|---|---|---|
| 1.0 | 1.09 | 1.0 |
| 0.5 | 0.58 | 2.6 |
| 0.25 | 0.26 | 2.4 |
表3.Boil ＆BoostによるhlgG含有サンプルのインターアッセイの精度
| 濃度（ng/ml） | 計算濃度 | 平均% CV |
|---|---|---|
| 1.0 | 1.10 | 3.4 |
| 0.5 | 0.50 | 3.5 |
| 0.25 | 0.24 | 1.6 |
Inter-Assay Percision
表4.標準曲線サンプルのインターアッセイ精度 （hlgGなし）
| 濃度（ng/ml） | 平均% CV |
|---|---|
| 1.6 | 1.0 |
| 0.8 | 3.1 |
| 0.4 | 3.2 |
| 0.2 | 2.6 |
| 0.1 | 7.2 |
| 0.05 | 21.1* |
*濃度がLLOQ以下の場合
表5。Dilute & GoによるhlgG含有サンプルのアッセイ内精度
| 濃度（ng/ml） | 計算濃度 | 平均% CV |
|---|---|---|
| 1.0 | 1.09 | 6.2 |
| 0.5 | 0.58 | 2.4 |
| 0.25 | 0.26 | 5.5 |
表6.Boil & BoostによるhlgG含有サンプルのインターアッセイの精度
| 濃度（ng/ml） | 計算濃度 | 平均% CV |
|---|---|---|
| 1.0 | 1.10 | 3.7 |
| 0.5 | 0.50 | 7.5 |
| 0.25 | 0.24 | 4.7 |
精度
表7.標準曲線サンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 平均エラー（%） | 平均回収率% |
|---|---|---|
| 1.6 | -2.5 | 97.5 |
| 0.8 | 6.3 | 106.3 |
| 0.4 | 14.2 | 114.2 |
| 0.2 | 8.6 | 108.6 |
| 0.1 | -10.6 | 89.4 |
| 0.05 | -51.6* | 48.4* |
*濃度がLLOQ以下の場合
表9.Boil & BoostによるhlgG含有サンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 平均エラー（%） | 平均回収率% |
|---|---|---|
| 1.0 | 9.8 | 109.8 |
| 0.5 | 0.1 | 100.1 |
| 0.25 | -5.6 | 94.4 |
表8.Dilute & GoによるhlgG含有サンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 平均エラー（%） | 平均回収率% |
|---|---|---|
| 1.0 | 8.6 | 108.6 |
| 0.5 | 15.1 | 115.1 |
| 0.25 | 3.7 | 103.7 |
定量限界（LoQ）
The LoQ determined from the standard curve with no IgG present was calculated to be 0.07 ng/ml. The LoQ for the NGL-Impact® A spiked samples in the presence of hIgG was 0.87 ppm when using Dilute & Go method and 0.048 ppm for Boil & Boost method.
検出限界（LoD）
The LoD determined from the standard curve was calculated to be 0.06 ng/ml. The LoQ for the NGL-Impact® A spiked samples in the presence of hIgG was 0.64 ppm using Dilute & Go and 0.04 ppm for Boil & Boost.
希釈の直線性
図 1。希釈グラフの直線性のグラフは、Dilute & Go法、Boil & Boost法のいずれにおいても、IgGの存在を確認した濃度範囲において、精度の高い相関関係を示すグラフです。
CONCLUSIONS
アッセイ内データによると、標準曲線サンプルの精度は許容範囲内で、%CV値は0.8～7.1%でした。アッセイ内データは、サンプルは相対的な精度と正確さでアッセイされたことを示していました。
アッセイ内データにより、データが再現可能であることが示されました。%また、LoQ以上の濃度では、アッセイ間の変動係数は7.2％以下でした。サンプルのアッセイ間精度は、2.4～7.5%の範囲でした。
相対誤差%で測定したLoQを超える濃度の精度は、標準では-10.6～14.2 、Dilute＆GoメソッドおよびBoil＆Boostメソッドで分析されたサンプルの場合-5.6～15.1でした。
The LoQ determined from the standard curve with no IgG present was calculated to be 0.07 ng/ml. The LoQ for the NGL-Impact® A spiked samples in the presence of hIgG was 0.87 ppm when using Dilute & Go method and 0.048 ppm for Boil & Boost method.
The LoD determined from the standard curve was calculated to be 0.06 ng/ml. The LoQ for the NGL-Impact® A spiked samples in the presence of hIgG was 0.64 ppm using Dilute & Go and 0.04 ppm for Boil & Boost.
このLoQと同じかそれ以上の濃度のサンプルはすべて、%CV値が1.0～3.5%であり、15%の限界値を下回っています。
EXPLANATION OF CALCULATIONS
精度（%CV）
Precision was calculated by determining the standard deviation between NGL-Impact® A spiked sample data points and dividing by the mean value. According to the ‘Guidance for Industry: Bio-analytical Method Validation’ text, precision should be within 15%.
イントラアッセイ精度
The intra-assay precision was calculated for each NGL-Impact® A spiked sample concentration by averaging the %CV values across all assays.
インターアッセイ精度
3つのアッセイの各計算結果間の標準偏差を決定し、次に平均値で割ることにより、各濃度点についてインターアッセイの精度を計算しました。
定量限界（LoQ）
The limit of quantitation (LoQ) was defined as 10 times the standard deviation of 0 ng/ml sample. The standard deviation of the 0 ng/ml OD value was multiplied by 10 then added to base 0 ng/ml OD value. The LoQ was then generated by entering the summed value into the linear equation. For each kit the LoQ was reported as ng NGL-Impact® A per ml (ng/ml) buffer, and ng NGL-Impact® A per mg hIgG (ppm) for NGL-Impact® A spiked samples run in presence of hIgG.
検出限界（LoD）
The limit of detection (LoD) was defined as 3 times the standard deviation of 0 ng/ml Protein A sample. The standard deviation of the 0 ng/ml OD value was multiplied by 3 then added to base 0 ng/ml OD value. The LoD was then generated by entering the summed value into the standard curve equation. For each kit a LoD was reported as ng NGL-Impact® A per ml (ng/ml) buffer and in parts per million (ppm) against IgG concentration.
精度
精度は、理論上のスパイク濃度と比較した、アッセイによって決定された回収率として説明されます。
Example standard curve
